商品詳情
【培養(yǎng)條件】
L-15(CellCook cat:CM2001,或同配方) 10%胎牛血清(CellCook cat:CM1002L,或更高級(jí)別)
【推薦培養(yǎng)試劑】
配套完全培養(yǎng)基(CellCook cat:CC0505G)
【傳代比例】
1:4傳代(培養(yǎng)面積比)
【傳代方式】
消化3-5分鐘
【換液頻率】
1-2天換液一次
【凍存液配方】
L-15+10%FBS+10%DMSO
【難度等級(jí)】
++
【培養(yǎng)要點(diǎn)】
L15培養(yǎng)基不需二氧化碳平衡pH值
【特征特性】
SW480源自一位51歲白人男性患者的原位直腸腺癌,而SW620源自同一病人一年后的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶。該細(xì)胞CSAp和直腸抗原3陰性;角蛋白陽性;p53基因第273位密碼子的G→A突變引起Arg→His替代,309位密碼子的C→T突變導(dǎo)致Pro→Ser替代;細(xì)胞p53蛋白表達(dá)水平升高;癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis 和fos的表達(dá)呈陽性;未檢測(cè)到癌基因N-myc的表達(dá);不表達(dá)Matrilysin(一種與腫瘤侵襲相關(guān)的金屬蛋白酶)。有報(bào)道稱該細(xì)胞表達(dá)GM-CSF。
藥篩:通過慢病毒感染的方式將攜帶熒光的基因片段整合進(jìn)細(xì)胞基因組,使細(xì)胞表達(dá)熒光蛋白,在熒光顯微鏡下可以進(jìn)行觀察,標(biāo)記后的細(xì)胞非常容易進(jìn)行追蹤檢測(cè)。由于是用慢病毒轉(zhuǎn)染的方式,導(dǎo)致細(xì)胞熒光表達(dá)量的不確定性,為增強(qiáng)細(xì)胞熒光表達(dá)量可進(jìn)行抗性篩選。正常培養(yǎng)過程中定期(一個(gè)月2-3次或頻率自定)用終濃度4ug/mL的嘌呤霉素追加篩選,凍存后復(fù)蘇也建議可以追加篩選一次,不需要培養(yǎng)過程中每天都加藥。