商品詳情
【培養(yǎng)條件】
RPMI 1640(CellCook cat:CM2017,或同配方) 20%胎牛血清(CellCook cat:CM1002L,或更高級別)
【推薦培養(yǎng)試劑】
配套完全培養(yǎng)基(CellCook cat:CC1913G)
【傳代比例】
1:3傳代(培養(yǎng)面積比);維持細(xì)胞濃度在2*10^5-1*10^6cells/ml
【傳代方式】
離心收集(1000rpm,5分鐘)
【換液頻率】
2~3天換液1次
【凍存液配方】
RPMI 1640+20%FBS+10%DMSO
【難度等級】
++
【培養(yǎng)要點(diǎn)】
需控制細(xì)胞密度
【特征特性】
KG1細(xì)胞系由H.P.Koeffler和D.W.Golde建立。骨髓抽自一個59歲的患有紅白血病而后又發(fā)展成急性骨髓原性白血病的男性白人。KG1細(xì)胞在形態(tài)上類似急性髓原白血病,表現(xiàn)為明顯的多形化,骨髓母細(xì)胞和骨髓細(xì)胞占優(yōu)勢。少量細(xì)胞是成熟的粒細(xì)胞,也有微量的巨噬細(xì)胞和嗜曙紅細(xì)胞。培養(yǎng)35代后表現(xiàn)出與母細(xì)胞系不同的形態(tài)特征。亞型KG-1a由未分化的早幼粒細(xì)胞組成。相比KG-1細(xì)胞,KG-1a在軟瓊脂培養(yǎng)中對集落刺激因子沒反應(yīng),也不表達(dá)LA樣抗原。同時對佛波酯誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞分化有抵抗作用,佛波酯也不會引起細(xì)胞增殖。
藥篩:通過慢病毒感染的方式將攜帶熒光的基因片段整合進(jìn)細(xì)胞基因組,使細(xì)胞表達(dá)熒光蛋白,在熒光顯微鏡下可以進(jìn)行觀察,標(biāo)記后的細(xì)胞非常容易進(jìn)行追蹤檢測。由于是用慢病毒轉(zhuǎn)染的方式,導(dǎo)致細(xì)胞熒光表達(dá)量的不確定性,為增強(qiáng)細(xì)胞熒光表達(dá)量可進(jìn)行抗性篩選。正常培養(yǎng)過程中定期(一個月2-3次或頻率自定)用終濃度4ug/mL的嘌呤霉素追加篩選,凍存后復(fù)蘇也建議可以追加篩選一次,不需要培養(yǎng)過程中每天都加藥。