商品詳情
【培養(yǎng)條件】
MEM(CellCook cat:CM2015,或同配方) 10%胎牛血清(CellCook cat:CM1002L,或更高級別) 添加劑:10ug/ml胰島素(CellCook cat:CM1007),1X 非必需氨基酸(CellCook cat:CM1008S/L)
【推薦培養(yǎng)試劑】
基礎培養(yǎng)基:
MEM(CellCook cat:CM2015)
血清:
南美胎牛血清(CellCook cat:CM1002L,或更高級別)
添加劑:
10ug/ml胰島素(CellCook cat:CM1007),1X 非必需氨基酸(CellCook cat:CM1008S/L)
【傳代比例】
不高于1:3傳代(培養(yǎng)面積比)
【傳代方式】
消化3-5分鐘
【換液頻率】
每周換液2-3次
【凍存液配方】
MEM+10%FBS+10UG/ML胰島素+1X 非必需氨基酸+10%DMSO
【難度等級】
++
【培養(yǎng)要點】
細胞貼壁較慢,完全攤開需2天
【特征特性】
該細胞是從一名69歲的白人女性乳腺癌患者的胸腔積液中分離建立的。該細胞保留了多個分化乳腺上皮的特性,包括:能通過胞質(zhì)雌激素受體加工雌二醇并能形成隆突結(jié)構(DOMES);該細胞表達WNT7B癌基因;TNF-Α可以抑制MCF-7細胞的生長;抗雌激素處理能調(diào)節(jié)細胞胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白(IGFBP)的分泌。
藥篩:通過慢病毒感染的方式將攜帶熒光的基因片段整合進細胞基因組,使細胞表達熒光蛋白,在熒光顯微鏡下可以進行觀察,標記后的細胞非常容易進行追蹤檢測。由于是用慢病毒轉(zhuǎn)染的方式,導致細胞熒光表達量的不確定性,為增強細胞熒光表達量可進行抗性篩選。正常培養(yǎng)過程中定期(一個月2-3次或頻率自定)用終濃度4ug/mL的嘌呤霉素追加篩選,凍存后復蘇也建議可以追加篩選一次,不需要培養(yǎng)過程中每天都加藥。