商品詳情
【培養(yǎng)條件】
Alpha MEM(CellCook cat:CM2003,或同配方) 12.5%馬血清(CellCook cat:CM1001) 12.5%澳洲胎牛血清(CellCook cat:CM1003L) 添加劑:0.2mM肌醇,0.1mM巰基乙醇,0.02mM葉酸,100-200U/ml IL-2(Cellcook cat:CM1014)
【推薦培養(yǎng)試劑】
基礎(chǔ)培養(yǎng)基:
Alpha MEM(CellCook cat:CM2003)
血清:
澳洲胎牛血清(CellCook cat:CM1003L)+馬血清(CellCook cat:CM1001)
添加劑:
0.2mM肌醇,0.1mM巰基乙醇,0.02mM葉酸,100-200U/ml IL-2(Cellcook cat:CM1014)
配套完全培養(yǎng)基(CellCook cat:(CellCook cat:CC1624GM))
【傳代比例】
1:3傳代(培養(yǎng)面積比)
【傳代方式】
離心收集(1000RPM,5分鐘)
【換液頻率】
2~3天換液1次
【凍存液配方】
50%完全培養(yǎng)基+40%胎牛血清+10%DMSO
【難度等級】
++++
【培養(yǎng)要點】
使用指定培養(yǎng)基配方,且對IL-2依賴,建議使用高質(zhì)量IL-2進(jìn)行培養(yǎng),細(xì)胞對養(yǎng)分及氧氣敏感,需定期更換培養(yǎng)基及控制細(xì)胞密度,且細(xì)胞生長速度較NK92/MI緩慢。具體細(xì)節(jié)可登陸公司網(wǎng)站進(jìn)行查看
【特征特性】
NK-92是從一位患有急進(jìn)性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細(xì)胞衍生來的一株白細(xì)胞介素-2依賴型NK細(xì)胞株。這株細(xì)胞對很多惡性細(xì)胞有細(xì)胞毒性;鉻釋放試驗顯示它能殺死K562和DAUDI細(xì)胞。NK-92細(xì)胞(經(jīng)過照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的體外免疫清掃而不危及血細(xì)胞的功能。NK-92細(xì)胞有以下特征:CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45,CD54表面標(biāo)記陽性,CD56亮;CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20,CD23, CD34和HLA-DR陰性。PCR檢測細(xì)胞存在EBV的DNA序列。
藥篩:通過慢病毒感染的方式將攜帶熒光的基因片段整合進(jìn)細(xì)胞基因組,使細(xì)胞表達(dá)熒光蛋白,在熒光顯微鏡下可以進(jìn)行觀察,標(biāo)記后的細(xì)胞非常容易進(jìn)行追蹤檢測。由于是用慢病毒轉(zhuǎn)染的方式,導(dǎo)致細(xì)胞熒光表達(dá)量的不確定性,為增強(qiáng)細(xì)胞熒光表達(dá)量可進(jìn)行抗性篩選。正常培養(yǎng)過程中定期(一個月2-3次或頻率自定)用終濃度4ug/mL的嘌呤霉素追加篩選,凍存后復(fù)蘇也建議可以追加篩選一次,不需要培養(yǎng)過程中每天都加藥。