商品詳情
【培養(yǎng)條件】
RPMI 1640(CellCook cat:CM2017,或同配方) 10%胎牛血清(CellCook cat:CM1002L,或更高級(jí)別)
【推薦培養(yǎng)試劑】
配套完全培養(yǎng)基(CellCook cat:CC0209M)
【傳代比例】
1:3傳代(培養(yǎng)面積比)
【傳代方式】
懸浮部分離心收集(1000rpm,5分鐘),貼壁部分消化2-3分鐘
【換液頻率】
每周換液2-3次
【凍存液配方】
RPMI 1640+10%FBS+10%DMSO
【難度等級(jí)】
++
【培養(yǎng)要點(diǎn)】
懸浮與貼壁混合,需要將培養(yǎng)基中的懸浮細(xì)胞與消化完成的貼壁細(xì)胞一并離心收集再做傳代
【特征特性】
該細(xì)胞是1982年由Carney D和Gazdar AF等從一位小細(xì)胞肺癌患者的胸腔積液中建立的。細(xì)胞的原始形態(tài)并不具有小細(xì)胞肺癌特征。這個(gè)細(xì)胞株是小細(xì)胞肺癌的生化和形態(tài)學(xué)上的變種,表達(dá)神經(jīng)元特有的烯醇酶和腦型肌酸激酶同工酶;左旋多巴脫羧酶、蠶素、抗利尿激素、催產(chǎn)素或胃泌激素釋放肽未達(dá)到可檢測(cè)水平。與正常細(xì)胞相比,該細(xì)胞c-myc DNA序列擴(kuò)增約20倍,RNA增加15倍。最初傳代培養(yǎng)基用含有5%FBS的RPMI1640,另外添加10 nM氫化可的松、0.005 mg/ml胰島素、0.01 mg/ml轉(zhuǎn)鐵蛋白。
藥篩:通過(guò)慢病毒感染的方式將攜帶熒光的基因片段整合進(jìn)細(xì)胞基因組,使細(xì)胞表達(dá)熒光蛋白,在熒光顯微鏡下可以進(jìn)行觀察,標(biāo)記后的細(xì)胞非常容易進(jìn)行追蹤檢測(cè)。由于是用慢病毒轉(zhuǎn)染的方式,導(dǎo)致細(xì)胞熒光表達(dá)量的不確定性,為增強(qiáng)細(xì)胞熒
光表達(dá)量可進(jìn)行抗性篩選。正常培養(yǎng)過(guò)程中定期(一個(gè)月2-3次或頻率自定)用終濃度4ug/mL的嘌呤霉素追加篩選,凍存后復(fù)蘇也建議可以追加篩選一次,不需要培養(yǎng)過(guò)程中每天都加藥。