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McCoy's 5a(CellCook cat:CM2002,或同配方) 10%胎牛血清(CellCook cat:CM1002L,或更高級(jí)別)

1:3傳代（培養(yǎng)面積比）

消化3-5分鐘

每周換液2-3次

McCoy's 5a+10%FBS+10%DMSO

該細(xì)胞是1964年由Fogh J用移植培養(yǎng)方法和含15%FBS的F12培養(yǎng)液從原發(fā)性腫瘤分離的。近來，已建株的培養(yǎng)細(xì)胞用含血清的McCoy’s 5a培養(yǎng)基培養(yǎng)。該細(xì)胞系在裸鼠中成瘤，也能在類固醇處理的地鼠中成瘤。該細(xì)胞可合成IgA、CEA、TGFβ結(jié)合蛋白和黏液素；表達(dá)尿激酶受體，但沒有檢測到血漿酶原活性；不表達(dá)CD4，但細(xì)胞表面表達(dá)半乳糖神經(jīng)酰胺（HIV的可能替代受體）。該細(xì)胞系癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、Myb、sis、fos陽性；p53基因過表達(dá)，并且在273位密碼子存在G→A突變。
藥篩：通過慢病毒感染的方式將攜帶熒光素酶（Luciferase,Luc）的基因片段整合進(jìn)細(xì)胞基因組，使細(xì)胞表達(dá)熒光蛋白，常用于構(gòu)建各類皮下、原位或轉(zhuǎn)移型的CDX腫瘤模型、活體動(dòng)物體內(nèi)光學(xué)成像實(shí)驗(yàn)和啟動(dòng)子活性分析等。由于是用慢病毒轉(zhuǎn)染的方式，導(dǎo)致細(xì)胞熒光表達(dá)量的不確定性，為增強(qiáng)細(xì)胞熒光表達(dá)量可進(jìn)行抗性篩選。熒光株培養(yǎng)條件與野生型細(xì)胞一致。連續(xù)培養(yǎng)的細(xì)胞篩選頻率為1-2個(gè)月，篩選時(shí)，將嘌呤霉素直接添加到培養(yǎng)基中，細(xì)胞正常培養(yǎng)傳代即可，每次篩選時(shí)間為一周，嘌呤霉素終濃度為4μg/mL。長期凍存的細(xì)胞，復(fù)蘇后第二代待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定時(shí)，可進(jìn)行篩選，維持陽性細(xì)胞比例。篩選過程中，建議不要使用細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)，抗生素會(huì)影響部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果。