儲(chǔ)存條件:本產(chǎn)品冰袋運(yùn)輸;需 2~8℃保存,有效期 24 個(gè)月。如需保存更長時(shí)間請(qǐng)置于-20℃儲(chǔ)存。
如短時(shí)間內(nèi)凍存液用量較少,可分裝后取部分凍存液于-20℃冷凍保存,但盡量減少凍融次數(shù)。
本產(chǎn)品含 DMSO 與酚紅,不含外源蛋白與血清。
細(xì)胞凍存/復(fù)蘇操作流程
- 建議凍存細(xì)胞密度為 1×106 -107 個(gè)/ml;
- 相較于常規(guī)細(xì)胞凍存方法(完全培養(yǎng)基+5~10%DMSO),本產(chǎn)品對(duì)正常細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞的凍存效果更優(yōu),細(xì)胞復(fù)蘇后狀態(tài)更好。
- 如凍存細(xì)胞為原代細(xì)胞、干細(xì)胞、PBMC 等敏感/不易培養(yǎng)類型的細(xì)胞,建議先進(jìn)行至少為期 1 周的試驗(yàn)性細(xì)胞冷凍保存預(yù)實(shí)驗(yàn)測(cè)試,同時(shí)細(xì)胞留樣繼續(xù)培養(yǎng),待確認(rèn)性能后再正式使用。
- 適用細(xì)胞(已測(cè)試):293T、MCF7、Hep3B、HepG2、5TGM1、THP-1、MFC、A549、BV2、KASUMI-1、OMM2.3、HELA、K562、RAW264.7、臍帶血干細(xì)胞、原代內(nèi)皮細(xì)胞、原代間充質(zhì)干細(xì)胞等。
?細(xì)胞凍存1. 細(xì)胞懸液在室溫以 1000rpm(或 80-100g RCF)離心 5 分鐘。
2. 輕輕吸走上清液,注意不要擾動(dòng)細(xì)胞團(tuán)。
3. 按量吸取無血清細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞團(tuán),輕柔吹散均勻。
4. 將重懸的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到標(biāo)記好的凍存管中,1.0-1.5ml/管。
5. 標(biāo)記分裝好的凍存管可直接置入-80℃冰箱中長期保存(長達(dá) 60 個(gè)月以上),液氮保存效果更
佳。(如需轉(zhuǎn)入液氮保存,則需要先在-80℃凍存 24h 以上,再轉(zhuǎn)入液氮中長期保存。) 細(xì)胞復(fù)蘇
開始之前,提前準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)材料,確保整個(gè)解凍復(fù)蘇程序可以在最短的時(shí)間內(nèi)完成。
1. 從-80℃冰箱/液氮中取出凍存管,(待液氮揮發(fā)后)立即放入 37℃水浴鍋中迅速解凍,輕搖凍存
管使其在1min 內(nèi)全部融化,時(shí)間越短對(duì)細(xì)胞影響越小。
2. 水浴中取出凍存管并移入超凈臺(tái)內(nèi)操作:將凍存管中細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至事先準(zhǔn)備好的含有5-10ml 細(xì)
胞培養(yǎng)基的離心管中,輕搖混勻。
3. 室溫 1000rpm(或 80-100g RCF)離心 5 分鐘,去除上清液。
4. 加入適量已回復(fù)至室溫的細(xì)胞完全培養(yǎng)基到 15mL 離心管中,加入的同時(shí)輕輕混勻。
5. 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)器皿中。
6. 鏡檢查看細(xì)胞狀態(tài),確認(rèn)沒有問題后將培養(yǎng)器皿放入 37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。