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賽庫小課堂 | RPMI-8226細(xì)胞培養(yǎng)要點(diǎn)及注意事項(xiàng)
發(fā)布日期:2025.01.06
 

 

RPMI 8226細(xì)胞是1966年從一名61歲男性漿細(xì)胞瘤患者的外周血中分離的B淋巴細(xì)胞,可以產(chǎn)生免疫球蛋白輕鏈,沒有證據(jù)表明細(xì)胞能產(chǎn)生重鏈(細(xì)胞質(zhì)型或分泌型)。RPMI 8226細(xì)胞可用于3D細(xì)胞培養(yǎng)、免疫學(xué)和免疫系統(tǒng)研究,也是一種合適的轉(zhuǎn)染宿主。

 
 

 

培養(yǎng)信息

 

推薦培養(yǎng)試劑

?基礎(chǔ)培養(yǎng)基:RPMI1640(改良型)(CellCook cat:CM2006)

?血清:澳洲胎牛血清(CellCook cat:CM1003/CM1003L)

?配套完全培養(yǎng)基(CellCook cat:CC1608M)

?傳代比例:1:3傳代(培養(yǎng)面積比)

?傳代方式:離心收集(1000rpm,5min)

?換液頻率:2~3天換液1次

?倍增時(shí)間:60 hours (PubMed=25984343); 33.5 hours (NCI-DTP); ~60-70hours (DSMZ)

?凍存液配方:RPMI 1640(改良型)+10%澳洲胎牛血清+10%DMSO

?難度等級(jí):++

?特征特性:來源于一位61歲的男性漿細(xì)胞瘤患者;可產(chǎn)生免疫球蛋白輕鏈,未檢測(cè)到重鏈。

 

賽庫參考圖片

 

 

其他細(xì)胞庫圖片

 

 

生長(zhǎng)特性及要點(diǎn)

 

1.細(xì)胞主要以懸浮的單細(xì)胞形式生長(zhǎng),大小不均一,偶有輕微聚團(tuán),靜置培養(yǎng)后會(huì)有少量細(xì)胞貼壁,可在換液或傳代時(shí)輕輕吹開,日常培養(yǎng)使用無TC處理的培養(yǎng)瓶;

2.本株細(xì)胞比較脆弱,碎片較普通懸浮細(xì)胞多,建議用澳胎培養(yǎng);建議細(xì)胞密度維持在2×10^5個(gè)/ML~1×10^6個(gè)/ML,密度過低或者過高都容易造成細(xì)胞死亡,維持適高密度有利于細(xì)胞生長(zhǎng);

3.細(xì)胞倍增時(shí)間較長(zhǎng),生長(zhǎng)速度相對(duì)較慢,日常培養(yǎng)按1:3比例傳代大概3天可傳一次,如果增殖活力不佳可通過豎置培養(yǎng)瓶或者適當(dāng)補(bǔ)加血清進(jìn)行培養(yǎng);

4.細(xì)胞密度低的時(shí)候,盡量少動(dòng)少離心,以減少對(duì)細(xì)胞的傷害;

5.在培養(yǎng)過程中可能會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞碎片過多的情況,可以用低速離心去除(800rpm離心3min,低速離心會(huì)損失部分細(xì)胞,細(xì)胞密度過低和狀態(tài)較差時(shí)需謹(jǐn)慎處理);

6.細(xì)胞凍存數(shù)量1x10^6 ~2x10^6個(gè)/ml/管,細(xì)胞剛復(fù)蘇有一定恢復(fù)期,需要維持培養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定,靜置培養(yǎng)24h后再觀察細(xì)胞狀態(tài)。

 

 
 
建系文獻(xiàn)

Matsuoka Y, Moore GE, Yagi Y, Pressman D. Production of free light chains of immunoglobulin by a hematopoietic cell line derived from a patient with multiple myeloma. Proc Soc Exp Biol Med. 1967 Aug-Sep;125(4):1246-50. doi: 10.3181/00379727-125-32327. PMID: 6042436.

 

 

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