細(xì)胞背景介紹
THP-1細(xì)胞系是從一名患有急性單核細(xì)胞白血病的1歲小男孩的外周血中分離得到的，自1980年建系以來(lái)，THP-1細(xì)胞被廣泛應(yīng)用于單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的相關(guān)機(jī)制、免疫和炎癥信號(hào)通路等研究中。THP-1細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，相比于ML-2、HL-60、U937等白血病細(xì)胞系，THP-1細(xì)胞具有更接近于人原代單核細(xì)胞的形態(tài)和功能特征（包括細(xì)胞分化標(biāo)記）。并且相對(duì)于人外周血單核細(xì)胞（PBMC），THP-1更易在實(shí)驗(yàn)室中培養(yǎng)和擴(kuò)增，且具有更穩(wěn)定的基因背景，不存在PBMC的個(gè)體差異性問(wèn)題，利于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)。因此，THP-1是各大實(shí)驗(yàn)室常用的急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系，是研究免疫和炎癥的理想工具。
細(xì)胞用途--誘導(dǎo)分化
RAW264.7細(xì)胞
RAW264.7被廣泛應(yīng)用于破骨細(xì)胞的研究，在具體的誘導(dǎo)RAW264.7向破骨細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)中，主要用到的誘導(dǎo)因子是RANKL，同時(shí)最好選擇低傳代代數(shù)的RAW264.7細(xì)胞，當(dāng)代數(shù)超過(guò)20代時(shí)，RANKL幾乎無(wú)效。
破骨細(xì)胞具有骨吸收(bone resorption)的功能，破骨細(xì)胞功能異常會(huì)造成骨質(zhì)吸收的異常，若其功能亢進(jìn)，會(huì)引起骨退行性病變?nèi)绻琴|(zhì)疏松癥、癌癥的骨轉(zhuǎn)移、關(guān)節(jié)炎等；若其功能障礙或衰退，會(huì)造成骨硬化癥、致密性成骨不全、Pagets病、大塊骨溶解病等。因此借助RAW264.7的可誘導(dǎo)分化能力，加深對(duì)破骨細(xì)胞的研究，能夠幫助我們更好的對(duì)相關(guān)疾病進(jìn)行預(yù)防和治療。
THP-1細(xì)胞
在科學(xué)研究中，THP-1細(xì)胞常被誘導(dǎo)分化為M1和M2型巨噬細(xì)胞和泡沫細(xì)胞，用于炎癥的研究。在具體的誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)中，THP-1首先被佛波酯（PMA）誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞，隨后進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)：
I 誘導(dǎo)為M1型巨噬細(xì)胞：通過(guò)脂多糖（LPS）和IFN-γ誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞進(jìn)一步發(fā)生M1型極化，釋放出TNF-α、IL-6等細(xì)胞因子，這是經(jīng)典的炎癥模型。
I 誘導(dǎo)為M2型巨噬細(xì)胞：通過(guò) IL-4 、IL-13和巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞進(jìn)一步發(fā)生M2型極化，分泌TGF-β、IL-10等抑制性細(xì)胞因子，模擬炎癥后期的組織修復(fù)和重建的過(guò)程。
I 粥樣硬化慢性炎癥模型：在氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）的作用下，巨噬細(xì)胞可進(jìn)一步形成泡沫細(xì)胞，泡沫細(xì)胞的形成是動(dòng)脈粥樣硬化形成的早期事件，屬于慢性炎癥模型。
細(xì)胞特性及培養(yǎng)注意事項(xiàng)
RAW264.7細(xì)胞
狀態(tài)正常的細(xì)胞是開(kāi)展科研的基礎(chǔ)！養(yǎng)過(guò)RAW264.7細(xì)胞的小伙伴們一定都會(huì)發(fā)現(xiàn)，這株細(xì)胞非常容易分化，影響細(xì)胞狀態(tài)和后續(xù)實(shí)驗(yàn)，那我們應(yīng)該如何合理培養(yǎng)這株細(xì)胞呢？I RAW264.7細(xì)胞對(duì)胰酶不敏感，細(xì)胞傳代時(shí)推薦使用細(xì)胞刮刀。I RAW264.7細(xì)胞通常會(huì)連片生長(zhǎng)，散布在培養(yǎng)瓶/皿中。傳代時(shí)，保證中等密度接種，調(diào)整細(xì)胞傳代比例，避免因細(xì)胞過(guò)稀導(dǎo)致生長(zhǎng)緩慢等情況的發(fā)生。I 培養(yǎng)時(shí)注意觀察細(xì)胞形態(tài)，當(dāng)發(fā)生細(xì)胞由圓形或橢圓形變?yōu)樗慕切?，或伸出偽足等情況時(shí)，說(shuō)明細(xì)胞狀態(tài)改變，需及時(shí)傳代，以免產(chǎn)生不可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
THP-1細(xì)胞
THP-1細(xì)胞比較敏感，培養(yǎng)時(shí)要小心操作，保證培條件的穩(wěn)定，讓我們來(lái)看一下培養(yǎng)過(guò)程中的細(xì)節(jié)和注意事項(xiàng)吧！I THP-1細(xì)胞在酸性環(huán)境中生長(zhǎng)速度較快，當(dāng)培養(yǎng)基呈橘紅色時(shí)，適宜細(xì)胞生長(zhǎng)。培養(yǎng)基中需添加β巰基乙醇。I THP-1細(xì)胞對(duì)血清品質(zhì)要求較高，推薦使用優(yōu)質(zhì)胎牛血清。I THP-1細(xì)胞具有密度依賴性，培養(yǎng)密度較低時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢。
I THP-1細(xì)胞傳代采取半換液法，搖勻細(xì)胞后，均分到兩個(gè)瓶子里，每瓶再補(bǔ)加等量培養(yǎng)基。當(dāng)細(xì)胞碎片較多時(shí)，采取離心法按比例將細(xì)胞接種到新的培養(yǎng)中。
I THP-1細(xì)胞易受凍存影響，因此應(yīng)選擇細(xì)胞狀態(tài)良好時(shí)凍存，并適量增加凍存的細(xì)胞量，以提高復(fù)蘇存活率。
I THP-1細(xì)胞復(fù)蘇后通常需要3-5天的時(shí)間恢復(fù)狀態(tài)，建議復(fù)蘇后48小時(shí)不要接觸細(xì)胞，晃動(dòng)培養(yǎng)瓶/皿，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
細(xì)胞接收后常見(jiàn)問(wèn)題
Q：收貨后，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變？
A：受運(yùn)輸?shù)挠绊?，?xì)胞培養(yǎng)條件改變，細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)暫時(shí)的形態(tài)改變的情況，后續(xù)改善細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境，傳代并穩(wěn)定培養(yǎng)后，細(xì)胞可恢復(fù)正常的形態(tài)。
Q：RAW264.7細(xì)胞復(fù)蘇注意事項(xiàng)？
A：RAW264.7細(xì)胞對(duì)空間狀態(tài)很敏感，復(fù)蘇后及時(shí)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)密度，當(dāng)密度達(dá)到70%-80%時(shí)進(jìn)行傳代。
Q：細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢？
A：細(xì)胞傳代時(shí)，如果匯合度較低，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢。因此可通過(guò)減小培養(yǎng)面積、增加細(xì)胞接觸等方式提高細(xì)胞密度，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。
Q：THP-1細(xì)胞發(fā)生貼壁現(xiàn)象？
A：少量細(xì)胞貼壁屬于正常情況，將細(xì)胞懸液重新接種到新的培養(yǎng)瓶/皿中即可。當(dāng)貼壁細(xì)胞比例超過(guò)20%，說(shuō)明細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)異常，需要排查細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中可能出現(xiàn)的各種問(wèn)題。
Q：THP-1細(xì)胞出現(xiàn)聚團(tuán)生長(zhǎng)的情況？
A：少量細(xì)胞聚團(tuán)生長(zhǎng)屬于正?，F(xiàn)象，特別是細(xì)胞密度較低時(shí)容易發(fā)生。建議更換血清品牌，并適量提高完全培養(yǎng)基中的血清比例（不超過(guò)20%），當(dāng)細(xì)胞密度增加后，聚團(tuán)現(xiàn)象將自發(fā)改善。
Q：收貨后RAW264.7貼壁性差？
A：RAW264.7細(xì)胞有一定的聚團(tuán)生長(zhǎng)的特性，聚團(tuán)后不容易貼壁?？梢噪x心收集細(xì)胞，隨后用1mL培養(yǎng)基重懸，輕柔吹打直到細(xì)胞被吹成單細(xì)胞，就可以重新鋪板了。
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