圖一：ATCC中Caco-2細(xì)胞形態(tài)
Caco-2 (人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞)分離自一位72歲男性直腸原位癌。當(dāng)細(xì)胞長滿時(shí)，表現(xiàn)出典型的腸細(xì)胞分化的特征。Caco-2細(xì)胞表達(dá)維生素A酸結(jié)合蛋白Ⅰ和視黃醇結(jié)合蛋白Ⅱ，角蛋白陽性。
本文為大家介紹Caco-2生長特性和常見問題解決策略。
生長特性
呈島狀生長，Caco-2細(xì)胞群的邊界光滑。
空泡多
Caco-2細(xì)胞群中常常含有巨大的空泡，這是細(xì)胞本身的特性，屬于正?，F(xiàn)象。
難消化
Caco-2細(xì)胞與細(xì)胞間連接緊密，細(xì)胞難以消化解離。生長時(shí)間越長，細(xì)胞間連接越緊密，消化時(shí)間越長。消化時(shí)間為5-10分鐘，該細(xì)胞難以被吹散為單個(gè)細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞能夠被吹散為小的細(xì)胞團(tuán)塊，即可終止消化。
圖四：Caco-2 細(xì)胞難消化 200x
生長周期長
Caco-2傳代周期較長，倍增時(shí)間約為72h。Caco-2貼壁和生長都較為緩慢。按1:3傳代的情況下，約一周傳代一次。
Caco-2有少量發(fā)亮的細(xì)胞漂浮或黏附在細(xì)胞克隆上，是正常的，隨后會(huì)進(jìn)入克隆并正常生長。所以避免頻繁觀察細(xì)胞，可以減少漂浮細(xì)胞產(chǎn)生。如果細(xì)胞隨著培養(yǎng)過程，漂浮得越來越嚴(yán)重，甚至大塊兒飄起，就要檢查培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)環(huán)境是否出現(xiàn)異常。細(xì)胞密度越高，消化時(shí)間越長。
血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞狀態(tài)變化，建議選用高質(zhì)量的胎牛血清。
培養(yǎng)條件
培養(yǎng)體系：DMEM,HIGH GLUCOSE 10%胎牛血清（南美級(jí)別）。
傳代比例：不高于1:3傳代（培養(yǎng)面積比）。
傳代方式：消化5~10分鐘。
換液頻率：每周換液1-3次。
倍增時(shí)間： 3~4天（ATCC）；~80小時(shí)(DMSZ)；~32小時(shí)(PBCF)；~60-70小時(shí)(CLS)。
凍存液配方：DMEM,HIGH GLUCOSE+10%FBS+10%DMSO。
培養(yǎng)要點(diǎn)
該細(xì)胞貼壁較慢，在復(fù)蘇或傳代初期，若有許多細(xì)胞或細(xì)胞碎片漂浮為正?，F(xiàn)象，為避免在細(xì)胞附著初期干擾細(xì)胞，建議到第三天才換液。待細(xì)胞貼壁后，一周即可長滿（1:3傳代），若細(xì)胞生長過慢，可適當(dāng)調(diào)整血清濃度到20%。
常見問題
Lisa
細(xì)胞不貼壁怎么辦？
賽庫生物
Lisa
漂浮細(xì)胞多怎么辦？
賽庫生物
注意事項(xiàng)
1、細(xì)胞貼壁慢特別是剛復(fù)蘇時(shí)，一般2-3天貼壁展開，會(huì)有空泡。
2、細(xì)胞在傳代細(xì)胞中，注意消化散，否則難以貼壁。
3、成團(tuán)生長，細(xì)胞密度越大，表面空泡黑點(diǎn)越多。
4、一般細(xì)胞長至80%傳代，細(xì)胞成片，其實(shí)密度很大。
5、細(xì)胞生長太滿對細(xì)胞狀態(tài)影響嚴(yán)重，傳代后易碎，死亡。
6、細(xì)胞生長時(shí)間越長，消化時(shí)間越長。
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