慢病毒屬(lentivirus)在分類上屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科,為二倍體RNA病毒。原發(fā)感染的細(xì)胞以淋巴和巨噬細(xì)胞為主,導(dǎo)致感染個(gè)體發(fā)病。慢病毒感染的主要臨床特點(diǎn)是在出現(xiàn)典型的臨床癥狀以前,經(jīng)歷較長的潛伏期,之后緩慢發(fā)病,因此被稱為慢病毒。
慢病毒基因組是正鏈RNA,其基因組進(jìn)入細(xì)胞后,在細(xì)胞漿中被其自身攜帶的反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄為cDNA,并形成DNA整合前復(fù)合體,進(jìn)入細(xì)胞核后,DNA將整合到細(xì)胞基因組中。慢病毒載體(Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基礎(chǔ)上改造而成的病毒載體系統(tǒng),它能高效地將目的基因(或shRNA)導(dǎo)入動(dòng)物和人的原代細(xì)胞或細(xì)胞系。整合后的DNA轉(zhuǎn)錄為mRNA,回到胞漿中,進(jìn)而表達(dá)目的蛋白或產(chǎn)生RNAi效應(yīng)。
慢病毒基因組是正鏈RNA,其基因組進(jìn)入細(xì)胞后,在細(xì)胞漿中被其自身攜帶的反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄為cDNA,并形成DNA整合前復(fù)合體,進(jìn)入細(xì)胞核后,DNA將整合到細(xì)胞基因組中。慢病毒載體(Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基礎(chǔ)上改造而成的病毒載體系統(tǒng),它能高效地將目的基因(或shRNA)導(dǎo)入動(dòng)物和人的原代細(xì)胞或細(xì)胞系。整合后的DNA轉(zhuǎn)錄為mRNA,回到胞漿中,進(jìn)而表達(dá)目的蛋白或產(chǎn)生RNAi效應(yīng)。
慢病毒載體介導(dǎo)的基因表達(dá)或RNAi干擾作用持續(xù)且穩(wěn)定,原因是目的基因整合到宿主細(xì)胞基因組中,并隨細(xì)胞基因組的分裂而分裂。另外,慢病毒載體能有效感染并整合到非分裂細(xì)胞中。以上特性使慢病毒載體與其它病毒載體相比,比如不整合的腺病毒載體、整合率低的腺相關(guān)病毒載體、只整合分裂細(xì)胞的傳統(tǒng)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體,有鮮明的特色。大量文獻(xiàn)研究表明,慢病毒載體介導(dǎo)的目的基因長期表達(dá)的組織或細(xì)胞包括腦、肝臟、肌肉、視網(wǎng)膜、造血干細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等,又很少引發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng),能達(dá)到良好的基因治療效果,具有廣闊的應(yīng)用前景,現(xiàn)已成為國際上最通用的轉(zhuǎn)染系統(tǒng)之一,廣泛應(yīng)用于各類實(shí)驗(yàn)室。
慢病毒技術(shù)應(yīng)用
1.將目的基因/shRNA轉(zhuǎn)入難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,比如神經(jīng)元細(xì)胞、干細(xì)胞;
2.將目的基因/shRNA轉(zhuǎn)入動(dòng)物組織,以期獲得長期表達(dá);
3.構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白/shRNA的細(xì)胞系,再用ex vivo的方法導(dǎo)入動(dòng)物體內(nèi);
4.基因治療、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、基因敲除;
5.藥物研究:構(gòu)建表達(dá)受體蛋白的細(xì)胞系,研究藥物作用;
6.快速建立生產(chǎn)目的蛋白的細(xì)胞系,非常有前途的真核細(xì)胞表達(dá)方法。
1.將目的基因/shRNA轉(zhuǎn)入難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,比如神經(jīng)元細(xì)胞、干細(xì)胞;
2.將目的基因/shRNA轉(zhuǎn)入動(dòng)物組織,以期獲得長期表達(dá);
3.構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白/shRNA的細(xì)胞系,再用ex vivo的方法導(dǎo)入動(dòng)物體內(nèi);
4.基因治療、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、基因敲除;
5.藥物研究:構(gòu)建表達(dá)受體蛋白的細(xì)胞系,研究藥物作用;
6.快速建立生產(chǎn)目的蛋白的細(xì)胞系,非常有前途的真核細(xì)胞表達(dá)方法。