STR(Short Tandem Repeat,短串聯(lián)重復(fù)序列)
基因位點由長度為3-7個堿基對的短串連重復(fù)序列組成,這些重復(fù)序列廣泛存在于人類基因組中,可作為高度多態(tài)性標(biāo)記,被稱為細(xì)胞的DNA指紋,其可通過PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))來檢測。STR基因座上的等位基因可通過擴增區(qū)域內(nèi)重復(fù)序列的拷貝數(shù)的不同來區(qū)分,在毛細(xì)管電泳分離之后可通過熒光檢測來識別。隨后通過一定的計算方法,即可根據(jù)所得的STR分型結(jié)果與專業(yè)的細(xì)胞STR數(shù)據(jù)庫做比對,從而推算出樣品所屬的細(xì)胞系或可能存在的交叉污染的細(xì)胞系名稱。
◆ STR分型圖譜根據(jù)實際PCR擴增后檢測到的片段長度和分型信息,會得到該細(xì)胞STR檢測結(jié)果的峰圖:
通常情況下,人源細(xì)胞或小鼠細(xì)胞STR圖譜上,一個基因位點只會出現(xiàn)1個或2個峰,即純合和雜合。
一個基因位點出現(xiàn)3個及以上峰稱為多等位基因:
●存在1-2個多等位基因可能源于細(xì)胞變異,不視為污染,也可能是三倍體等多倍體突變現(xiàn)象;
● 當(dāng)結(jié)果中出現(xiàn)≥3個多等位基因提示可能存在同源物種交叉污染。
MDA-MB-436細(xì)胞STR位點信息
結(jié)果表明:該人源細(xì)胞分型結(jié)果良好,無人源細(xì)胞交叉污染。其20個位點全部為單(純合)或雙峰(雜合),根據(jù)鑒定得到的細(xì)胞STR位點信息可在細(xì)胞數(shù)據(jù)庫中進行比對,數(shù)據(jù)來源包括ATCC,DSMZ,JCRB等細(xì)胞庫以及文獻和資料記載。
RKO細(xì)胞STR位點信息
結(jié)果表明:該人源細(xì)胞分型結(jié)果良好,無人源細(xì)胞交叉污染。其20個位點全部為單(純合)或雙峰(雜合),根據(jù)鑒定得到的細(xì)胞STR位點信息可在細(xì)胞數(shù)據(jù)庫中進行比對,數(shù)據(jù)來源包括ATCC,DSMZ,JCRB等細(xì)胞庫以及文獻和資料記載。
在檢測結(jié)果有效的前提下,將受檢細(xì)胞系的STR位點的基因分型數(shù)據(jù)與其對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)STR基因分型數(shù)據(jù)進行比對,其匹配度與鑒定結(jié)果關(guān)系如下:匹配度鑒定結(jié)果≥80%為標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系或為標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系的衍生細(xì)胞系,55%-80%需結(jié)合細(xì)胞系形態(tài)、細(xì)胞系特異性標(biāo)記物等做輔助分析并進行綜合判斷,≤55%與其對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系不相關(guān)。
RKO細(xì)胞官方細(xì)胞數(shù)據(jù)庫結(jié)果比對
結(jié)果表明:受檢RKO細(xì)胞系的STR位點基因分型數(shù)據(jù)與其對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)STR基因分型數(shù)據(jù)比對,匹配度鑒定結(jié)果均≥80%,證明受檢RKO細(xì)胞系為標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系或為標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系的衍生細(xì)胞系。
若需解決人及部分小鼠以外種屬細(xì)胞無法采用STR鑒定進行檢測的問題,以及種屬間細(xì)胞交叉污染的問題,可采用細(xì)胞種屬鑒定方法。
線粒體COI基因具有種屬特異性,常用于進行物種鑒定。通過提取細(xì)胞DNA,用種屬熒光復(fù)合引物MIX對動物線粒體COI基因進行擴增,然后進行瓊脂糖凝膠電泳的分析方法,快速準(zhǔn)確地判斷檢測細(xì)胞的種屬以及是否存在不同種屬的交叉污染。
智人391bp;中國倉鼠315bp;恒河猴287bp;非洲綠猴222bp;大鼠 196bp;犬172bp;小鼠150bp;牛102bp。