CHO細(xì)胞(Chinese Hamster Ovary cells,中國倉鼠卵巢細(xì)胞)是一種來源于中國倉鼠卵巢細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)細(xì)胞系。中國倉鼠于1948年被帶到美國,1957年,T.Puck從波士頓癌癥研究基金會的實(shí)驗(yàn)室獲得了一只中國倉鼠,在那里他用它獲得了原始的CHO細(xì)胞系。從那時(shí)起,人們發(fā)現(xiàn)CHO細(xì)胞在許多研究中都很有用。
在60多年的CHO細(xì)胞研究歷史中,從原始細(xì)胞系衍生出多種具有不同屬性的不同細(xì)胞系。常見的CHO衍生物是CHO-K1。它于1957年誕生,是早期CHO細(xì)胞的亞克隆,未改造過,屬于野生型細(xì)胞。但1968年的突變分析表明,CHO-K1細(xì)胞缺乏甘氨酸生物合成的基因,而且它比原始的CHO細(xì)胞具有更少的DNA。

ATCC CHO-K1細(xì)胞圖

賽庫生物 CHO-K1細(xì)胞圖


中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞是生產(chǎn)蛋白類藥物的首選宿主細(xì)胞,因?yàn)榕c其他系統(tǒng)相比,CHO細(xì)胞具有以下優(yōu)點(diǎn):
可進(jìn)行許多翻譯后修飾以獲得生物仿制藥,幾乎與人類相同的質(zhì)量產(chǎn)品,這些產(chǎn)品顯示出卓越的生物相容性和藥物活性;
作為貼壁和懸浮培養(yǎng)生長良好,高生產(chǎn)率,是大規(guī)模培養(yǎng)和GMP程序的理想選擇;
許多經(jīng)過充分驗(yàn)證的遺傳工具,可用于優(yōu)化 CHO 細(xì)胞。從基因引入到敲除、敲低和翻譯后沉默;
獲批產(chǎn)品數(shù)量驚人(用于約 50 種生物治療藥物生產(chǎn),這些藥物已在歐盟和美國獲得批準(zhǔn));
適用于無蛋白、無動物生產(chǎn)、無血清培養(yǎng)條件,并具有更好的穩(wěn)定性和安全性。


CHO細(xì)胞遺傳不穩(wěn)定性引起的表達(dá)不穩(wěn)定:通常,中國倉鼠體細(xì)胞的染色體為11對22條,而CHO細(xì)胞的染色體則發(fā)生了大面積不穩(wěn)定重排重組現(xiàn)象,不同細(xì)胞系染色體的數(shù)目也不恒定;
外源基因隨機(jī)整合引起的表達(dá)不穩(wěn)定:傳統(tǒng)方法主要是通過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后,利用壓力篩選從而獲得目的蛋白質(zhì)表達(dá)細(xì)胞株。因此,外源基因都是通過隨機(jī)整合方式,整合到CHO基因組內(nèi)。由于整合位點(diǎn)的不確定性,可能在細(xì)胞培養(yǎng)后期引起表達(dá)不穩(wěn)定;
糖基化模式:CHO細(xì)胞缺乏在人類細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的某些糖基轉(zhuǎn)移酶,因此它們不能表達(dá)所有的人類蛋白糖型,需要工藝條件的優(yōu)化而改變:已知細(xì)胞培養(yǎng)基中的某些成分對糖基化有特定的影響,例如,特定糖基轉(zhuǎn)移酶功能所必需的微量元素;優(yōu)化生物反應(yīng)器參數(shù),如pH值和DO,也可以有效地最大限度地生產(chǎn)所需的糖型。


CHO細(xì)胞能夠在無血清懸浮培養(yǎng)中以高密度生長,并且在延長的發(fā)酵周期中維持高水平的蛋白質(zhì)表達(dá)。市場上超過70%的蛋白質(zhì)藥物的首選制造細(xì)胞都是CHO細(xì)胞。
CHO細(xì)胞可以在外源表達(dá)的蛋白質(zhì)上摻入復(fù)雜的聚糖,如N-連接聚糖。有助于蛋白質(zhì)的折疊和細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸。重組蛋白表達(dá)側(cè)重于最大化每個(gè)分子中含有唾液酸的復(fù)雜聚糖的數(shù)量,CHO細(xì)胞糖基化之后,能增加對蛋白水解的抵抗力和延長體內(nèi)血清半衰期,所以CHO細(xì)胞成為最廣泛用作重組蛋白的哺乳動物細(xì)胞系。
CHO細(xì)胞隸屬于成纖維細(xì)胞,內(nèi)源性蛋白分泌少,可高效分離和純化重組蛋白。且CHO細(xì)胞具有重組蛋白的高表達(dá)和高擴(kuò)增能力,與真核表達(dá)系統(tǒng)中酵母細(xì)胞、果蠅細(xì)胞S9的翻譯后修飾對比,更接近人員細(xì)胞蛋白質(zhì)的修飾。


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