細(xì)胞培養(yǎng)過程中很容易稍有不慎細(xì)胞狀態(tài)就會變差，這些小細(xì)節(jié)究竟如何影響的細(xì)胞狀態(tài)？在培養(yǎng)時(shí)我們又該如何避免？今天給大家整理了細(xì)胞培養(yǎng)過程中最容易忽視的幾大致命細(xì)節(jié)，一起來學(xué)習(xí)吧！
市面上常見的有經(jīng)TC處理的細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿，可以輔助貼壁細(xì)胞貼壁；培養(yǎng)懸浮細(xì)胞時(shí)應(yīng)采用無TC處理的細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿。
貼壁細(xì)胞在正常情況下都會貼壁，但某些細(xì)胞本身特性貼壁性差，例如Beas-2B人正常支氣管上皮細(xì)胞和HCEC-B4G12人角膜內(nèi)皮細(xì)胞，在培養(yǎng)特殊細(xì)胞時(shí)，需要對培養(yǎng)瓶/皿進(jìn)行包被，促進(jìn)細(xì)胞黏附，才可以使用。常用的包被液有纖連蛋白、I型膠原等混合物，培養(yǎng)時(shí)可根據(jù)說明書使用。
?新手建議使用細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)，方便操作。
無論什么細(xì)胞，匯合度80%~90%左右即需要傳代，不可長滿。正常細(xì)胞（二倍體）存在貼壁接觸抑制，長滿后細(xì)胞生長停止，而腫瘤細(xì)胞等非正常細(xì)胞，接觸抑制作用較弱，可生長至較高的細(xì)胞密度，但某些細(xì)胞一旦長過，其損傷難以逆轉(zhuǎn)，所以培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)不建議細(xì)胞密度太高。
某些特殊的細(xì)胞匯合度達(dá)到100%會開始分化，例如C2C12小鼠成肌細(xì)胞，分化的細(xì)胞沒有增殖能力，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)，耽誤實(shí)驗(yàn)進(jìn)展，需要嚴(yán)格控制細(xì)胞傳代密度。
對于一些聚團(tuán)疊加生長的細(xì)胞，需根據(jù)實(shí)際細(xì)胞量判斷是否需要傳代，并不單純依據(jù)細(xì)胞鋪滿瓶底的匯合度，及時(shí)傳代，避開細(xì)胞損傷，且這類細(xì)胞的消化時(shí)間一般較久，需要根據(jù)具體的細(xì)胞量適當(dāng)調(diào)整消化時(shí)間。例如HepG2人肝癌細(xì)胞、MCF7人乳腺腺癌細(xì)胞、Caco-2人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞等。
胰蛋白酶通常使用0.25%，含EDTA，不含鈣鎂離子。鈣鎂離子會與EDTA螯合，影響消化效果。所以加胰酶消化前需要用不含鈣鎂離子的PBS緩沖液潤洗2~3次。
細(xì)胞消化時(shí)間可以參考說明書，但具體的消化時(shí)間需要結(jié)合細(xì)胞量、胰酶濃度等適當(dāng)調(diào)整。調(diào)整。
大多數(shù)細(xì)胞的消化時(shí)間在2-3分鐘左右，部分貼壁性較差的細(xì)胞消化時(shí)間較短，部分貼壁牢固且聚團(tuán)疊加生長的細(xì)胞消化時(shí)間較長，最長的有30分鐘，具體的細(xì)胞時(shí)間參考說明書，并結(jié)合實(shí)際細(xì)胞量調(diào)整。
消化程度判斷：顯微鏡下細(xì)胞皺縮變圓，分散成單細(xì)胞，傾斜培養(yǎng)瓶可呈流沙狀脫落即可終止消化。一些聚團(tuán)疊加生長的細(xì)胞在消化過程中可能不會完全分散成單細(xì)胞，皺縮變圓，分解成小細(xì)胞團(tuán)，輕輕吹散再消化1分鐘左右即可終止消化。
大部分培養(yǎng)基適合于95%空氣 5%CO2的培養(yǎng)箱。但L15培養(yǎng)基適合于100%空氣，無CO2的培養(yǎng)箱，L15培養(yǎng)基不需要CO2平衡PH，CO2會導(dǎo)致培養(yǎng)液PH降低（培養(yǎng)液變黃），嚴(yán)重影響細(xì)胞生長；所以使用L15培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，但沒有100%空氣培養(yǎng)箱時(shí)，可以選擇密封的細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿培養(yǎng)。
對于大部分人源細(xì)胞和溫血動物細(xì)胞系來講，比較適宜的培養(yǎng)溫度是37℃。但有細(xì)胞比較特殊，需要用特定的溫度培養(yǎng)，比如hFOB1.19 SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞細(xì)胞的培養(yǎng)溫度為34℃，37℃培養(yǎng)會死亡。
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