是指在細胞培養(yǎng)過程中,部分細胞貼壁生長,部分細胞懸浮生長,稱為貼壁懸浮混合型細胞。
LLC(小鼠Lewis肺癌細胞)、BV2(小鼠小膠質細胞)、PC3(人前列腺癌細胞)、NR8383(大鼠肺泡巨噬細胞)、SP2/0-Ag14(小鼠骨髓瘤細胞)、COLO 205(人結腸癌細胞)等。
圓形細胞為懸浮細胞,不規(guī)則型細胞為貼壁細胞。
大部分圓形懸浮細胞,少量圓形貼壁細胞。
細胞培養(yǎng)
補液/換液
補液:細胞量較少時直接補加1-2mL新鮮的完全培養(yǎng)基即可。
換液:細胞量較多但不夠傳代時,2-3天離心換液一次。
用移液槍吸出培養(yǎng)液(含懸浮的細胞)轉移到無菌離心管中;
貼壁部分:用1mL PBS洗細胞,吸出PBS放入到第1步裝有培養(yǎng)液的離心管中收集(不要直接丟棄,里面有細胞);
加入1mL 0.25%胰酶EDTA溶液,傾斜晃勻,吸去大部分胰酶,覆蓋所有細胞后置于37℃培養(yǎng)箱靜置消化,具體消化時間參考說明書結合細胞生長情況而定。
顯微鏡下觀察細胞消化情況,細胞皺縮變圓后,傾斜培養(yǎng)瓶,細胞呈流沙狀完全脫落,即可判斷細胞消化完成。
用2mL完全培養(yǎng)基終止消化,沿瓶壁將細胞輕柔吹落,均勻吹散。將消化下來的細胞懸液吹散細胞后收集到第1步的離心管;
將離心管在1000rpm 5min離心,離心完畢棄掉上清,加入新鮮的完全培養(yǎng)基重懸,按實際情況分瓶,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
注意事項
在操作過程中,每丟棄一個液體前都要想一下里面有沒有可能有細胞,避免丟失細胞。
細胞種類、細胞密度、細胞狀態(tài)、甚至胰酶的品牌,均影響到細胞的消化時間,所以消化的時候不要只看時間,以顯微鏡下細胞的狀態(tài)來確定消化終點,部分難消化的細胞消化時間甚至可以長達15分鐘。
細胞的傳代比例通常說的是等體積的容器,不同容器需要換算;例如:一個T25培養(yǎng)瓶的細胞傳到一個10cm培養(yǎng)皿里面,雖然是1傳1,但是比例可不是1:1;T25瓶底面積25cm²,10cm培養(yǎng)皿底面積約為55cm²(10cm的培養(yǎng)皿指的是培養(yǎng)皿的外徑,而培養(yǎng)皿的內徑約為8.4cm,故根據(jù)內徑可求出其底面積為55cm²),所以實際傳代比例為1:2.2。