Cell culture
不就是養(yǎng)細胞嘛，能有多難！信心來源于知識儲備，小編整理羅列了以下科普文章傳送門，哪里有疑問點哪里，給您支招和解惑，手把手帶您入門，新手胞友常備寶典的不二選擇，養(yǎng)細胞不再戰(zhàn)戰(zhàn)兢兢、小心翼翼！
01 細胞營養(yǎng)物及培養(yǎng)器皿選擇
? 細胞培養(yǎng)基最全介紹!
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? 賽庫即用型完全培養(yǎng)基
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? 養(yǎng)細胞，胎牛血清至關重要!
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? 好產品值得被推薦，我為胎牛血清代言!!
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? TC處理是什么
02 細胞接收
? 細胞接收操作及常見問題
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? 細胞接收說明
03 細胞培養(yǎng)
? 細胞培養(yǎng)全指南（含污染分類及防治）
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? 細胞培養(yǎng)中容易忽視的幾個致命細節(jié)
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? 細胞培養(yǎng)的常見難題
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? 貼壁細胞如何傳代
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? 懸浮細胞如何傳代
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? 貼壁懸浮混合型細胞--培養(yǎng)方法及注意事項
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? 細胞凍存和復蘇的那些事
04 細胞常見異常情況原因分析及解決方法
? 為什么細胞出現(xiàn)空泡？
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? 貼壁細胞不貼壁？
①消化過度造成細胞損傷→縮短消化時間或降低胰酶濃度，適度消化
②支原體污染→定期抽樣檢測，發(fā)現(xiàn)污染建議丟棄
③培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）→用無菌醋酸溶液調整pH值或充入無菌CO2
④細胞老化失去貼附性或者復蘇細胞本身狀態(tài)不好已經老化→啟用新的保種細胞
⑤接種細胞起始濃度太低或太高、接種細胞數(shù)目太少→調整合適的接種濃度，接種數(shù)目不要太少，否則無法分泌足夠的細胞外基質
? 細胞生長慢？
①更換培養(yǎng)液或血清→換培養(yǎng)條件前先取部分培養(yǎng)物做測試，測試后再確定是否更換
②培養(yǎng)液中細胞必需生長因子耗盡或成分破壞→補充生長因子或換新配置培養(yǎng)液
③培養(yǎng)物中出現(xiàn)少量污染→用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)污染建議丟棄
④試劑保存不當，成分破壞→血清于-10～-20℃保存，培養(yǎng)液于2～8℃避光保存，含血清完全培養(yǎng)液于2-8℃保存且在1周內用完
⑤細胞接種濃度太低→增加起始接種濃度
⑥細胞老化→啟用保種細胞
⑦支原體污染→定期檢測，發(fā)現(xiàn)污染建議丟棄
? 貼壁細胞生長周期變慢，邊養(yǎng)邊飄？
①傳代時密度太高或太低→建議貼壁細胞匯合度達80%傳代，傳代密度適中，傳代密度過低會延長生長周期
②傳代操作不當→根據細胞特性決定細胞消化時間，一般在顯微鏡下觀察細胞回縮變圓并有少量細胞脫落即可終止消化，難消化的細胞可分次消化
③頻繁換液或者清洗細胞也會導致細胞狀態(tài)變差→常規(guī)換液時間間隔為2～3天
? 貼壁細胞傳代后部分漂??？
①傳代前細胞密度太大→一般細胞匯合度達到80%時可進行傳代操作，傳代密度需適中，傳代密度過高也會導致傳代后漂浮
②細胞狀態(tài)不好→可通過提高血清比例、穩(wěn)定培養(yǎng)環(huán)境等方法進行改善
③吹打次數(shù)過多造成機械損傷→輕柔吹打，細胞呈單顆粒時可停止吹打，吹打過程避免氣泡產生
④培養(yǎng)基更換后不適應→更換回原來的培養(yǎng)基或與原培養(yǎng)基比例混合后使用使細胞有個適應期
? 貼壁細胞傳代后全部飄起？
檢查所使用的培養(yǎng)基的顏色是否偏紫色、瓶蓋是否透氣、不透氣瓶蓋是否被擰松、培養(yǎng)基量是否太少或培養(yǎng)基存放時間太長致培養(yǎng)基變堿→建議配好完全培養(yǎng)基后分裝到50mL離心管并于一周內用完，量少時放到15mL離心管里保存。（如果培養(yǎng)箱二氧化碳濃度升高，培養(yǎng)基顏色偏紫，PH升高，培養(yǎng)基會變堿）
? 貼壁細胞傳代后細胞成團？
①細胞本身特性→聚團生長屬于正常情況，除非實驗需要，否則沒必要強行分開
②傳代消化時消化時間不夠或沒吹散→下次傳代消化開即可
③血清品質差→盡量使用品質好一點的血清，細胞狀態(tài)馬上就會不一樣了，現(xiàn)在血清市場魚龍混雜，買的時候擦亮眼睛
④細胞狀態(tài)差→提高血清濃度
? 傳代后細胞變形？
①連續(xù)培養(yǎng)的細胞系不同實驗室培養(yǎng)的形態(tài)會有不一樣，就像hela細胞不同實驗室培養(yǎng)的形態(tài)都不一樣，個人操作和血清批次等都會影響細胞形態(tài)
②變形，細胞還在生長→可能是血清批次不一樣導致，建議使用同一批次血清，更換血清時需與原血清比例混合后使用，使細胞有過渡期
③變形，細胞不長且碎片增多→可能是傳代操作過程中損傷，常見于消化不當或支原體等污染致細胞病態(tài)，消化時間根據每個細胞的狀態(tài)來調整，不要消化過度或者消化不充分，培養(yǎng)過程嚴格無菌操作，確保細胞無外源污染
? 懸浮細胞貼壁？
①細胞本身特性→正?，F(xiàn)象
②靜置時間長沉底貼壁→晃一下或者拍一下能起來，貼壁松散的不用做特殊處理
③受刺激致貼壁→用無TC處理培養(yǎng)器皿，避免染菌，用優(yōu)質血清
? 懸浮細胞生長慢或不生長？
①接種密度太低→控制接種傳代密度
②細胞狀態(tài)差→豎瓶培養(yǎng)，提高血清濃度，傳代可以看情況選擇補液或者半換液方式
? 懸浮細胞聚團成簇？
①本身特性→正?，F(xiàn)象
②少量聚團，葡萄串狀→正?，F(xiàn)象，密度較低時易出現(xiàn)，可通過靜養(yǎng)（少操作，少觀察） 、補加血清（5%）等方式調整
③培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子→用無鈣鎂離子PBS洗滌細胞，輕輕吹散
④血清品質→使用優(yōu)質血清
⑤受運輸或者天氣等環(huán)境因素影響→正常培養(yǎng)等待恢復，狀態(tài)不好可補加血清
05 污染類型及防治
? 真菌污染
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? 細胞污染處理
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? 細胞污染哪里來，廢液處理很關鍵
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? 支原體污染和防治
06 細胞STR鑒定和解讀
? 詳細了解細胞STR鑒定
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? STR鑒定結果怎么看
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