SK-BR-3(人乳腺癌細胞)是1970年由TREMPE G和OLD LJ從一位43歲的白人女性乳腺癌患者的胸腔積液中分離得到的。該細胞亞顯微結(jié)構(gòu)特征包括微絲和橋粒、肝糖原顆粒、大溶酶體、成束的細胞質(zhì)纖絲;過表達HER2/C-ERB-2基因產(chǎn)物。
本文為大家介紹SK-BR-3細胞生長特性和常見問題解決策略。
一、培養(yǎng)條件
【培養(yǎng)體系】MCCOY'S 5A(CELLCOOK CAT:CM2002) 10%胎牛血清(南美進口級別)
【疾病】乳腺腺癌
【傳代比例】不高于1:3傳代(培養(yǎng)面積比)
【傳代方式】消化2-3分鐘
【換液頻率】每周換液2-3次
【凍存液配方】MCCOY'S 5A+10%FBS+10%DMSO
二、生長特性
SK-BR-3細胞在復(fù)蘇培養(yǎng)的第一周以及后續(xù)培養(yǎng)過程中都會出現(xiàn)松散貼壁和漂浮等情況。
SK-BR-3細胞復(fù)蘇后恢復(fù)正常生長狀態(tài)需要一定時間,可能會出現(xiàn)不貼壁漂浮的情況,這是正?,F(xiàn)象。
復(fù)蘇后幾天內(nèi)最好保持細胞不受干擾;在剛收到細胞時,可根據(jù)細胞密度進行傳代,傳代后3天若培養(yǎng)基無明顯變化不要處理細胞,減少挪動。
如果仍然有很多漂浮物,可將漂浮的活細胞收集起來,通過輕輕離心保留漂浮細胞,并在更換培養(yǎng)基時將其與附著的細胞一起添加回同一培養(yǎng)容器中,不要分離或丟棄漂浮細胞。
細胞最初會以小團塊的形式附著,許多細胞團仍處于懸浮狀態(tài),幾天后,細胞將貼壁生長并向外延伸,有時也會出現(xiàn)一些細胞碎片,通過換液可去除。
三、注意事項
● 完全攤開需1天。
● 細胞傳代不可過稀,1:3傳代生長一代需5-6天。
● SK-BR-3細胞有聚團生長特性,匯合度達到70%-90%即可傳代,如果細胞過度生長,就會分離漂浮。
● 若有大量漂浮的活細胞可以收集重新接種,切勿丟棄。